檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被1,25-二羥基維生素D3（1,25(OH)2D3）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的1,25-二羥基維生素D3（1,25(OH)2D3）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

試劑盒組成

注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、0.25、0.5、1、2、4 ng/mL

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.  樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

結果判斷

 繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

試劑盒性能

1.  準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。

2.  靈敏度：檢測濃度小于0.1 ng/mL。

3.  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4.  重復性：板內、板間變異系數均小于15%。

5.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6個月

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